1、Q:请教老师,我设计的sgRNA 与非靶序列相似度多大时会把这个非靶标基因也编辑了?是否可以理解为:在远离pam端有4个及以内的与靶序列不同碱基的序列都是可以被编辑的。即脱靶到了那些序列。A:有脱靶机会,但通常识别活性会比较低,一般地,脱靶是需要尽量避免的。如果想要敲除两个以上基因,需要针对要敲除的基因分别设计crispr以制备不同的sgRNA。 2.Q:crispr/Cas13在gRNA设计
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基于基因编辑质粒的相关问题讨论1、Q:利用crsipr敲除,可以用瞬转质粒嘛?A:可以!这样做得到的细胞是mosaic,即有的细胞是基因组编辑了,有的则没有;有的细胞基因敲除了,有点则没有。如果只要改变部分细胞基因即可的话,则可以通过瞬转,如以原代细胞为研究对象。 2、Q:保存领到的质粒和菌液,说明书上说质粒保存温度-20℃/-80℃,怎么决定?我把领到的装质粒和菌液的离心管插到一个管插上直接放进
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斑马鱼模型在化妆品研究中的运用(南京尧顺禹基因编辑斑马鱼模型、毒理研究)
化妆品已成为人们生活中的必需品,安全性和功效性评价是化妆品研发过程中非常重要的一个环节。斑马鱼具有传代时间短、饲养方便、价格低廉以及便于大规模筛选等优势,是一种有效、可靠、高通量的模式生物。目前,对斑马鱼致死和致畸的统计结果可用于化妆品原料的安全性评价和防晒剂抗紫外线的功效评价,其身体表面黑色素数量的变化可用于斑类白原料的功效评价,均呈现出良好的发展优势和应用前景。用斑马鱼评价化学品等健康安全的实
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