斑马鱼基因敲降思路
发布时间:
2019-06-28
基因敲降项目的一般工作思路：
1）首先分析目标基因在斑马鱼胚胎发育早期是否有表达（如果没有表达，则根本不存在敲降问题）。
2）设计并安排实验（RT-PCR）检测目标基因在胚胎发育早期的表达情况（目的在于确认目标基因在胚胎发育早期有表达，同时在有表达的情况下建立检测目标基因表达下调的检测方法）。实际上，即使数据库中有描述该基因在胚胎发育早期有表达，也要开展此项实验。
3）在确认该基因在胚胎发育早期有表达的情况下，再设计MO，然后订购MO（阻断翻译型MO-ATG和/或阻断原始mRNA剪接型MO-S）。在胚胎注射MO-S以验证MO-S是否能有效阻断目标基因原始mRNA的剪接（请注意，斑马鱼领域内的专家已经达成MO-ATG不再要求验证其活性。实际上是源于MO-ATG无法进行活性验证，故而我们推荐使用CRISPRi策略从抑制目标基因转录的水平上建立基因敲降的方法）。
